1. 实验室污染是导致假阳性结果的主要原因

 

  非洲猪瘟野毒感染时血液和组织中病毒载量非常高，经常检测到Ct值15左右的样本。样本处理和提取的过程中需要进行离心操作，这些高浓度的样本离心时容易造成气溶胶污染。对于血液和组织样本，检测非洲猪瘟病毒应该尽可能减少离心操作，这类样本病毒载量高、样本较纯净，可以采用免提取检测。

 

  实验室如果长期检测阳性样本，扩增产物中高浓度的目的片段很容易扩散到空气中并不断累积导致气溶胶污染。

 

  核酸自动提取仪可显著提高实验效率，然而，养殖企业实验室大多使用中小型核酸自动提取仪，并且没有适当的防污染措施，在样本处理过程中可能出现交叉污染。相对于气溶胶污染，样本处理过程中交叉污染导致的假阳性概率较小。

 

  2. 荧光定量PCR试剂盒污染或者非特异性反应

 

  某些试剂盒没有在GMP车间进行生产，或者GMP车间生产过程中车间洁净度不够或人员操作不规范，在试剂盒生产过程中可能出现阳性核酸片段或者质粒污染反应体系的情况。

 

  某些试剂盒生产工艺不过关，可能出现非特异性翘尾现象。

 

  试剂盒中引物、探针等原料品质不过关，质量控制不严格，也可能导致非特异性反应。

 

  3. 荧光定量PCR仪性能不佳导致翘尾

 

  笔者发现某些荧光定量PCR仪性能不佳，在反应后期出现非特异性翘尾峰。

 

  4. 电压不稳导致的基线不稳定

 

  很多养殖企业将实验室设置在猪场附近，使用电源大多是农用电，电压不稳定，会导致扩增基线不稳定。另外，猪场附近的临床实验室停电风险相对较高。建议这些实验室配备UPS紧急电源。

 

  5. 样本或者气泡干扰

 

  反应体系中存在气泡或者某些样本含有特殊成分可能干扰实验，产生非特异性扩增曲线，这种扩增曲线通常不呈现典型的S型扩增曲线形态。